Главная – Журналы – Атеросклероз 2018 номер 2

Цель исследования. Идентифицировать тип гибели эндотелиальных клеток при воздействии кальций-фосфатных бионов (КФБ) и определить, вызывают ли КФБ специфичный молекулярный ответ по основным клеточным сигнальным путям. Материал и методы. Культура иммортализованных лимфатических эндотелиальных клеток мыши линии 2H-11 экспонирована магний-фосфатным бионом (МФБ) либо сферическим или игольчатым кальций-фосфатным бионом (СКФБ и ИКФБ соответственно) в течение 24 ч, после чего выделяли белок RIPA-буфером с последующим иммуноблоттингом: 1) на эффекторные белки апоптоза (расщепленную каспазу-3 (cleaved caspase-3, cCasp-3) и расщепленную поли(АДФ-рибоза)полимеразу (cleaved poly (ADP-ribose) polymerase, cParp-1)); 2) на белки внутреннего пути апоптоза (X-связанный ингибитор апоптоза (X-linked inhibitor of apoptosis protein, Xiap), сурвивин (survivin), ингибитор активатора плазминогена (plasminogen activator inhibitor 1, Pai-1), митохондриальную сериновую протеазу HtrA2/Omi, цитохром c (cytochrome c), p53-зависимый модулятор апоптоза (p53 up regulated modulator of apoptosis, Puma)); 3) на белки основных сигнальных путей (фосфорилированную киназу, регулируемую внеклеточными сигналами (phosphorylated extracellular signal-regulated kinase, pErk), фосфорилированную митоген-активируемую протеинкиназу (phosphorylated mitogen-activated proteinkinase, pMapk), фосфорилированную киназу очаговой адгезии (phosphorylated focal adhesionkinase, pFak), фосфорилированный ядерный фактор каппа B (phosphorylated nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells, pNf-kB), Itch (E3 убиквитин-белковую лигазу), Gli (глиома-ассоциированный онкоген)). Оценка результата проводилась качественно (путем хемилюминесцентной детекции) и количественно (при помощи алгоритма программы ImageJ для анализа хемилюминесцентных гелей). Результаты. Как СКФБ, так и ИКФБ обладали сходным действием, кратно повышая содержание эффекторных белков апоптоза cCasp-3 и cParp-1, а также снижая уровень основного ингибитора внутреннего пути апоптоза Xiap в эндотелиальных клетках в сравнении с МФБ и контрольным чистым раствором фосфатно-солевого буфера. Напротив, содержание другого ингибитора внутреннего пути апоптоза сурвивина и антиапоптотического белка Pai-1 в экспонированных СКФБ и ИКФБ клетках было повышено предположительно вследствие активации внутриклеточного механизма отрицательной обратной связи. Не было выявлено надежного изменения уровня различных белков основных клеточных сигнальных путей между экспериментальными группами. Заключение. КФБ запускают внутренний путь апоптоза в эндотелиальных клетках, однако не вызывают специфичного молекулярного ответа по основным клеточным сигнальным путям.