Главная – Журналы – Сибирский научный медицинский журнал 2018 номер 6

В связи с широким развитием явления РНК-интерференции перед исследователями стоит задача получения эффективных переносчиков малых интерферирующих РНК (миРНК). Ранее нами получен модифицированный рекомбинантный полипептид на основе аполипопротеина А-I человека (апо А-I), способный связываться с плазмидными ДНК. Цель исследования - изучение способности модифицированных рекомбинантных белков апо А-I переносить миРНК в опухолевые клетки. Материал и методы. Исследования проводились на модели трансформированных макрофагов мышей линии RAW 264.7, стабильно экспрессирующих ген зеленого флуоресцирующего белка GFP (клеточная линия клона 8А3). В качестве переносчиков миРНК использовали рекомбинантный про-апо А-I и модифицированный аналог про-апо А-I, несущий на С-конце 10 аминокислотных остатков лизина (апоАK10). Для трансфекции использовали липофектамин 2000 (lipofectamine 2000). Белки получали из соответствующих штаммов-продуцентов E. coli . Объектом переноса служил дуплекс миРНК, в котором один нуклеотид был комплементарен матричной РНК гена gfp . Измерение флуоресценции клеток проводили с помощью флуоресцентного планшетного анализатора. Результаты и их обсуждение. Обнаружено, что белки про-апо А и апо АK10, меченные флуоресцеина изотиоцианатом, проникают в клетки линии RAW 264.7. Результаты исследования РНК-интерференции показали, что инкубация клеток с миРНК и липофектамином 2000 вызывает снижение флуоресценции клеток линии 8А3, что свидетельствует о корректном подборе миРНК к матричной РНК гена gfp . В то же время флуоресценция клеток клона 8А3 при культивировании с миРНК и рекомбинантными формами про-апо А-I и апо АK10 не отличалась от флуоресценции контрольных клеток, инкубированных только с миРНК. Заключение. Рекомбинантные модифицированные формы про-апо А-I и апо АK10 проникают в трансформированные мышиные макрофаги линии RAW264.7, однако не способствуют явлению РНК-интерференции в этих клетках.

http://sibmed.net/article/648/snmzh_6-2018_ryabchenko_29-34.pdf