ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ СКАВЕНДЖЕР-РЕЦЕПТОРОВ И МОЛЕКУЛ КЛЕТОЧНОЙ АДГЕЗИИ В КУЛЬТУРАХ ЭНДОТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА, ЭКСПОНИРУЕМЫХ МИНЕРАЛЬНО-ОРГАНИЧЕСКИМИ НАНОЧАСТИЦАМИ
М.Ю. Синицкий1,2, Е.А. Великанова1, Д.К. Шишкова1, А.В. Понасенко1, А.Г. Кутихин1
1ФГБНУ НИИ комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний, 650002, г. Кемерово, Сосновый бульвар, 6
max-sinitsky@rambler.ru
2ФГБНУ Федеральный исследовательский центр угля и углехимии СО РАН, 650000, г. Кемерово, просп. Советский, 18
Ключевые слова: бионы, наночастицы, эндотелиотоксичность, эндотелий, генная экспрессия, количественная ПЦР, bions, nanoparticles, endothelial toxicity, endothelium, gene expression, quantitative PCR
Страницы: 5-13
Подраздел: Оригинальные статьи
Аннотация
Цель исследования. Изучить особенности экспрессии генов, кодирующих белки, потенциально ответственные за эндотелиотоксичность минерально-органических наночастиц (бионов), а именно генов скавенджер-рецепторов SCARF1 , MSR1 , CD36 , LDLR , VLDLR и генов клеточной адгезии VCAM1 , ICAM1 , PECAM1 , SELE , SELP и CDH5 в культурах эндотелиальных клеток, экспонируемых магний-фосфатными (МФБ) и кальций-фосфатными (КФБ) бионами. Материал и методы. Материалом исследования послужила культура иммортализованных венозных эндотелиальных клеток человека линии EA.hy 926, а также коммерческие культуры первичных эндотелиальных клеток коронарной (HCAEC) и внутренней грудной (HITAEC) артерий. Клеточные культуры культивировали в присутствии искусственно синтезированных МФБ и КФБ и чистого фосфатно-солевого буфера (контроль). Непосредственно после окончания культивирования проведено выделение тотальной РНК из образцов изучаемых клеточных линий. На основе выделенной РНК с помощью реакции обратной транскрипции проведен синтез одноцепочечной кДНК. Оценка генной экспрессии в культурах венозных и первичных артериальных эндотелиальных клеток, культивируемых в присутствии МФБ и КФБ, проведена с помощью метода количественной ПЦР с детекцией результата в режиме реального времени с флуоресцентным красителем SYBRGreen. Статистическая обработка результатов осуществлялась в программе GraphPadPrism 6 (GraphPadSoftware). Результаты. Экспозиция клеток культуры EA.hy 926 МФБ не вызывала значительных изменений экспрессии изученных генов, кроме SELP и SELE , по сравнению с контролем. Двукратные изменения экспрессии показаны для генов SCARF1 и CD36 в культуре, экспонированной сферическими КФБ (СКФБ), а также для гена ICAM1 в культуре, экспонированной игольчатыми КФБ (ИКФБ). Воздействие на культуры HCAEC и HITAEC КФБ приводило к ярко выраженному снижению экспрессии генов CD36 и SELP и увеличению экспрессии гена ICAM1 как в HCAEC, так и HITAEC. Кроме этого в культуре HCAEC отмечено увеличение экспрессии генов VCAM1 и SELE в 2,5 раза в ответ на действие ИКФБ, а культура HITAEC характеризовалась двукратно повышенной экспрессией гена VLDLR (при культивировании в присутствии обоих типов КФБ) и PECAM1 (при культивировании в присутствии СКФБ). МФБ практически не влияли на экспрессию изученных генов в культурах EA.hy 926 и HCAEC, но в то же время усиливали экспрессию гена PECAM1 и снижали экспрессию генов SELP и CDH5 в культуре HITAEC. Заключение. Химический состав и морфология бионов, а также физиологические особенности сосудов влияют на профиль генной экспрессии в культурах эндотелиальных клеток.
DOI: 10.15372/ATER20180401 |
